病毒RNA提取试剂盒
中文名:病毒RNA提取试剂盒
英文名:Virus RNA Extraction Kit
CAS:N/A级别:N/A
分子量:N/A分子式:N/A
纯度:N/A储存条件:2-8℃
产品简介
病毒RNA提取试剂盒II型是I型（沉淀法）基础上利用吸附柱纯化RNA样品的试剂盒。适用于血清（血浆）等液体样品中微量病毒RNA的提取。
适用于各种材料，包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。
提取的RNA可用于RT-PCR和qRT-PCR。
操作步骤：（样品裂解，样品纯化，RNA收集）
一：样品裂解
1. 在 1.5 mL 离心管中加入 0.1-0.2 mL 液体病毒样品。如果病毒需要富集，可以将 1.5 mL 液体在 4℃下 24，000 g 冷冻离心 60 分钟，移弃 1.3 mL后继续操作。
2. 加入 0.6 mL裂解液VR，振荡 30 s混匀后室温放置 10 分钟。
注意：裂解液VR 在 4℃放置后可能会产生沉淀，使用前请置于 65℃水浴使 沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
二：样品纯化
1. 将溶液全部转移到RNA纯化柱中，室温放置 2 分钟。
2. 13000 g 室温离心 1 分钟，弃收集管中穿透液。
3. 在纯化柱中加入0.5mL RNA洗涤液，室温12,000rpm离心半分钟，弃穿透液。
三：RNA收集
1. 将结合有RNA的纯化柱12,000rpm 离心 1min，甩干乙醇。（乙醇的残留将会降低洗脱效果和影响下游实验，或者适当延长离心时间，将有助于乙醇的去除）
2. 弃收集管，将柱芯转移到1.5mL的RNase-free离心管中，加入30-50uL DNase＆RNase-free水，室温放置 1分钟，12,000 rpm离心1分钟洗脱RNA。得到的RNA可直接用于后续实验或者 -80℃ 存放。
3. 如果要提高 RNA 产量，加入30-50uL DNase＆RNase-free水重复洗脱一次，合并两次穿透液；如果要提高 RNA 浓度，使用第一次的洗脱液加回到纯化柱中重复洗脱。
四：疑难问题
病毒颗粒中的 RNA 或 DNA 是作为遗传物质保存，每个病 毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种 RNA 分子，每种 RNA 有很 多拷贝)，同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一)，样品 中病毒数往往又不是很多，使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞 中核酸的绝对量还少，所以操作中十分容易丢失。另外，由于得到的核酸 绝对量很少，不能使用电泳和测 OD 检测，只能通过 PCR 或 RT-PCR 检 测，而 PCR 或 RT-PCR 的条件又需要优化，所以要确定提取是否成功十 分不容易。
好评度