牛痘病毒-拓扑异构酶（Topoisomerase I ）  JNC9C5013

牛痘病毒-拓扑异构酶（Topoisomerase I ）

描述：

该 Topoisomerase I 来源于牛痘病毒（vacciniavirus），通过基因重组方案制备纯化。其能解旋 DNA 的超螺旋 结 构 ， 除 此 外 其 能 识 别 并 切 割 双 链 DNA 末 端[5’C(T)CCTT↓]，并且与 DNA 形成共价连接形成稳定复合物。该共价复合物遇到 DNA 的 5’-OH 基团后，重新连接形成完整 DNA 链。因此，使用该酶可作为 DNA 的连接有效工具。其可用于 DNA 的载体连接、缺刻修复、接头连接等实验。

应用 

DNA-载体连接 

缺刻修复 

接头连接

储存：-20°C 可保存 3 年。 

活性定义：1 单位（约 1 f mol）指在 37°C 条件下，1h 内使1 μg 超螺旋 pUC19 DNA 解旋所需要的酶量。 

使用注意事项 

（1）1×vaccinia TOPOI Buffer：50mM Tris-acetate (pH 7.5),100 mM NaCl, 2.5mM MgCl₂。 

（2）该酶的最佳反应温度为 37°C。80°C 20min 可使该酶失活。 

（3）该酶切割偶联试验时，识别位点[5’C(T)CCTT↓]的 3’端碱基数量影响偶联效率。 

（4）共价复合物进行 DNA 分子连接时，底物 5’-端需要保留-OH 基团。

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