DNA快速连接试剂盒
产品及特点
DNA连接反应通过T4 连接酶催化双链DNA的3'-OH和5'-P形成磷酸二脂键而将DNA共价连接在一起。被连接的DNA末端可以是粘末端(例如限制性切割EcoRI产生的末端)，也可以是平末端（限制性切割Sma I产生的末端)。Pheiffer等人发现PEG可以促进T4 DNA连接酶催化的连接反应[NAR,11,7853-7871,1983]，连接反应只需十分钟即可完成。本产品就是根据这一原理设计，其特点如下:
1.超快，整个连接反应只需要室温5分钟左右，反应液可以直接用于转化实验。
2．高效，溶液配方经过优化，每 ug插入DNA连接转化得到的重组子可达107左右。
3.既可用于平末端连接，也可用于粘末端连接，包括PCR产物与T载体的连接。
4.简单,客户只需要提供载体和插入片段即可。
规格及成分
运输及保存低温运输，-20℃保存，有效期一年。
2.最后在每管中加入1 uL溶液B，轻柔吹打混合均匀后用微量离心机将液体全部甩到管底。
3.室温放置至少5分钟，最长可以放置过夜。
4.70℃保温10分钟。此步可以灭活有关的酶，否则转化效率有所降低。
5.根据使用的转化方法，每管各取适量用于转化实验，余下的放置在-20℃保存。
二:细菌转化及筛选(仅供参考，本产品不提供相关试剂)
6.将100 uL转化效率在1×108cfu/pg以上的感受态细胞于冰上解冻。
7.取5-10 uL连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀。
8.在冰上放置30分钟。
9．将离心管放42℃热休克90秒,然后快速将其转移到冰浴中放置1~2分钟。
10.每管中加900 uL LB培养基，37℃振荡培养1小时复苏细胞。
11.将100 uL复苏涂布到含Amp 的LB琼脂平板上（根据载体情况也可能需要加上X-gal和IPTG)。
12.室温4,000 rpm离心剩余的900 uL复苏细胞5分钟，弃去800 uL上清,用剩余100 uL培养基重悬细胞并涂布到含Amp 的LB琼脂平板上(可加X-gal、IPTG)。
13.将平板置于室温直至液体被吸收。此步非常重要，否则培养板将在37℃排除水分,细菌将随水在培养基上到处游动,不能形成单个菌落。
14．倒置平皿，于37℃培养，12~16小时后可出现菌落。一般情况下阳性对照组会有上千个菌落（ 100 uL转化液产生的菌落数×10)，自联对照只有少数几个菌落，样品组的菌落数取决于PCR回收片段的质量。
15.按常规方法筛选重组子。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
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