枯草杆菌WB600菌种
产品及特点 WB600 菌株是来源于 BS168 的变异，是蛋白酶缺陷型菌株，敲除了 6 个蛋白酶 基因。含红霉素抗性基因。转化方法简单、便捷，金黄色葡萄球菌带有抗性基因的质 粒可作为其载体，菌株没有致病性。细胞壁的组成简单，只含有肽聚糖和磷璧质，因 此在分泌的蛋白质产品中不会混杂有胞被内毒素（热源性脂多糖）。蛋白纯化简单，多 用于蛋白表达。
规格及成分
运输及保存 低温运输，-80℃保种保存，有效期一年。
使用方法 质粒转化枯草杆菌的方法有很多，如电转化、Spizizen 转化、原生质体转化等。根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方法。
1. 准备所需试剂与耗材：
1) 配制 40 mL（LB+0.5 M 山梨醇）:蛋白胨 10 g/L，酵母粉 5g/L，NaCl 10g/L，3.6g 山梨醇 pH=7.2。
2) 200 mL 电转培养基（0.5 M 山梨醇，0.5 M 甘露醇，10%甘油）：18g 山梨醇，18.5g 甘露醇，20 mL 甘油。
3) 10 mL RM（0.5M 山梨醇，0.38M 甘露醇）：0.9g 山梨醇，0.7g 甘露醇。
4) 2 个 50mL 离心管，灭菌。
2. 接种枯草杆菌 WB800N 于 3 mL 的 LB 培养基中，过夜培养。
3. 取 2.6 mL 过夜培养物接入 40 mL（LB+0.5 M 山梨醇）中，37℃，200rpm 培养至 OD600=0.85~0.95。
4. 将菌液冰水浴 10 分钟，然后 5000g，4℃离心 5 分钟收集菌体。
5. 用 50 mL 预冷的电转培养基（0.5 M 山梨醇，0.5 M 甘露醇，10%甘油），重新吹悬菌体，5000g，4℃离心 5 分钟去上清，如此漂洗 4 次。
6. 将洗涤后的菌体吹悬于 1 mL 电转培养基中，每 EP 管分装 60 μL。
7. 将 60 μL 感受态细胞中加入 50 ng DNA（1~8 μL），冰上孵育 2 分钟，加入预冷的电转杯（1 mm）中，电击一次。电转仪设置：2.0 kv，1 mm，电击 1 次。（电击结果：时间常数=4.5~5.0 ms，如果时间常数<4.2，则需要增加电转培养
基的漂洗次数或者提高感受态的稀释倍数来获得更高的转化效率。）
8. 电击完毕取出杯子并立即加入 1 mL RM（LB+0.5 M 山梨醇+0.38 M 甘露醇），37℃，200 rpm，复苏 3 小时后，涂板。37℃，过夜培养。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
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