Rnase Free DNase I  JNC9D3001

Rnase Free DNase I

描述：

本酶是将单链或双链 DNA 同等程度的随机分解，生成具有 5′-P 末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。由于RNase-free DNase I 中 Protease 已几乎被完全去除，从而提高了该酶在 pH 中性区域的稳定性。此外该酶中添加了Rnase Inhibitor，用于抑制 RNA 样品中残留的 RNase 核酸酶，因此可以有效抑制 RNA 提取过程中 Rnase 酶对 RNA的降解。Stop Buffer 终止反应后，可通过一步加热失活DNase I 活性。

*Rnase Free DNase I (10 U/μl)中含有 20 U/μl 的 RnaseInhibitor，故进行消化试验时不需要再额外添加 RnaseInhibitor。

活性定义 

以小牛胸腺 DNA 为底物，在 25℃、pH5.0 的条件下，1 分钟内使反应液的 260 nm 吸光度增加 0.001 所需要的酶量定义为 1 个活性单位（Kunitz Unit）。 

纯度 

10 U 的本酶和 1 μg 的 16S, 23S rRNA 在 37℃、pH7.5 的条件下反应 1 小时，RNA 的电泳谱带不发生变化 

应用：去除 RNA 样品中的 DNA 污染。 

储存：-20°C 可保存 2 年。

操作方法（去除 RNA 中的基因组 DNA 污染） 

1. 按以下组分配制反应体系

*若 RNA 样品中含有超过 5 μg 基因组 DNA 污染，请使用2 μl 该酶。 

2. 37°C 孵育 10min 以消化去除基因组 DNA。 

3. 孵育完毕后加入 5 μl 10× RD Stop Buffer，混合均匀室温放置 1min，并置于 75°C 10min 加热失活 DNase I。样品可直接用于下一步反转录等试验。 

注意： 

1）通常加热方法即可失活 DNase I。如需要去除残留的变性蛋白，可在 37°C 消化完毕后使用酚氯仿抽提并沉淀 RNA样品（不进行加热操作）。 

2）10× RD Stop Buffer 中含有螯合剂用于去除二价阳离子，进行加热失活前，必须加入 5 μl 10× RD Stop Buffer 并混合均匀，再进行热失活，否则会导致 RNA 降解。 

3）处理完毕的 RNA 样品进行一步反转录反应时，添加量需要<20%（如 20 μl 的反转录体系中加入量要<4 μl）

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