phi29 2.0 DNA聚合酶  JNC9A3703

phi29 2.0 DNA聚合酶

描述：phi29 2.0 DNA 聚合酶是 phi29 的改造体，并经多次纯化分离而得。在保留了 phi29 DNA 聚合酶的链置换、连续合成特性（>70kb）的基础上，提高了滚环扩增的反应温度，phi29 2.0 DNA 聚合酶可以在 42 度条件下持续的进行 DNA合成（而 phi29 DNA 聚合酶在此温度下反应活性很低）。 

这种高温的反应特性，在以下几个方面对实验有明显的提升：

（1）在 NGS 测序中，其提升了高 GC 含量、回文结构等复杂模板的延伸能力，使得 NGS 的覆盖度更均一，降低测序所需深度；（2）高温的反应条件，提升了 WGA 产物的合成量（2-5 倍），并缩短扩增时间（1~2h 完成建库扩增）； （3）降低测序中 Gap 区域，提升单细胞测序的数据质量和完整度；（4）降低非特异性扩增产物；（5）提升 MDA/RCA等实验的扩增性能和特异性。 

除此外，该酶仍然具有很强的 3’→5’外切酶校读功能，合成的 DNA 片段保真性高。该酶的外切酶活性较强，因此合成过程中引物需要 3’端硫代修饰，以降低外切活性对引物的切割效应。

储存：-20℃可保存 3 年。

使用注意事项 

（1）1×phi29 Buffer：50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mMMgCl2，10 mM (NH4)₂S04，4 mM DTT。必要时可单独额外添加终浓度 1 mM DTT 和 0.2 mg/ml BSA，可提高反应效率。 

（2）该酶的最佳反应温度为 42 ℃ （在 30~42℃。均有活性）。 

（3）65℃ 10min 即可使该酶失活。 

（4）根据实验类型需要，调整 dNTP 的浓度 100~500 μM。 

（5）添加 Yeast Pyrophosphatase可提高DNA 产量。（6）反应引物 3’端的硫代修饰可避免引物降解。

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