T7 RNA聚合酶
描述：
T7 RNA Polymerase 对 T7 噬 菌 体 启 动 子（TAATACGACT CACTATAG）具有高度的特异性，并可以其作为启动子，DNA 作为模板体外合成正义链或反义链RNA。双链线性平末端或 5’突出末端 DNA 均可作为 T7 RNAPolymerase 的底物模板，因此线性质粒、PCR 产物均可用作体外合成 RNA 的模板。
正义或反义 RNA 链取决于模板 DNA 序列与 T7 启动子的位置，DNA 位于 T7 启动子的下游，T7 RNA 聚合酶会转录出正 义 RNA ， 反 之 则 为 反 义 RNA 链 。 该 酶 来 自 重组 E.coli BL21 菌株纯化而得，无 RNA 聚合酶、DNase 和RNase 污染。
活性定义：在标准反应体系下，37℃ 1 小时内将 1 nmol 的ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量定义为一个活性单位。
1X T7 Transcription Buffer：40 mM Tris (pH 7.8), 10 mMNaCl, 6mM MgCl2,2 mM Spermidine HCl, 10 mM DTT
酶储存液：10 mM Tris-HCl, 0.1 M NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mMEDTA, 50% Glycerol, 0.01% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。
储存：置于-20°C 可保存 2 年，避免反复冻融。
热失活：70°C，10min。
操作方法
1.配制反应体系
2. 37℃孵育 1-3h。
3. 使用 RNaseFree DnaseI 去除 DNA 模板（可选）在体外转录反应结束后，向上述 20 μl 反应液中加入5 μl 的 10×RD Buffer 和 2 μl RNaseFree DnaseI(10U/μl)，并加入 23 μl 的 Rnase Free H2O至 50 μl，37℃孵育 15min。
4. 转录产物的纯化体外转录产物可选用 5minRNA 纯化试剂盒进行柱式纯化，以去除多余的盐、蛋白等杂质。也可以采用经典的 LiCl 沉淀法。
注意事项
1. 转录DNA模板的种类：推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。
2. 转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RnaseA会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为最佳模板。
3. 该酶对高浓度 NaCl 或 KCl 不耐受，当其浓度高于150 mM 时，其活性受到显著抑制（~50%）。
4. 在 20 μl 反应体系中加入 0.02U 热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量（提高 25~50%）。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
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