琼脂糖凝胶6FF
中文名:琼脂糖凝胶6FF
英文名:Sepharose 6FF
CAS:N/A级别:试剂级
分子量:N/A分子式:N/A
纯度:N/A储存条件:RT
产品简介
琼脂糖凝胶6FF是用6%浓度琼脂糖制备成的球型颗粒，作为凝胶层析介质使用。
性能参数：
*检测条件： 层析柱10mm×300mm *柱床高5cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。
使用说明：
本产品为传统的琼脂糖介质，非特异性吸附低，回收率高，可多次重复使用等特点，用于分子量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。
优点：高化学和物理稳定性、快速流动特性、维护方便、可扩大规模。
1.装柱
（1）让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。
（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，用去离子水清洗掉20%乙醇，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。
（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。
（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。
2. 平衡
让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。
建议使用离子强度为0.15或更大的缓冲液，以避免溶质分子和基质之间的任何不需要的离子相互作用。对于各Sepharose凝胶的推荐流速，请参考推荐流速越低，分离度越高。
3.上样
（1）样品用平衡液配制，样品一定要离心或过滤后上样。
（2）推荐的样品体积为总床体积的2-5%。
4. 洗脱
用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
5. 再生
一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。
在一些应用中，诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不掉。 这些可以使用下述步骤清除。
出现下面这些情况，是必须需要清洗再生的：
（1）背压增加；
（2）色谱柱顶部的颜色变化；
（3）分辨率降低；
（4）转换接头和凝胶表面之间出现空隙。
如果观察到增加的背压，在开始柱清洁程序之前先检查管路中的各个过滤阀、过滤膜是否被污染；
通过用0.1M NaOH以推荐线性流速洗涤柱子，除去沉淀的蛋白质，非特异性结合的蛋白质和脂蛋白。
6.注意
在装柱、使用和保存柱子的时候，始终要避免柱子流干气泡进入。
保存：
使用完的填料，用纯水将盐分彻底冲洗，最后保存在20%乙醇中，4℃保存。
注意事项：
1.上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。
2.在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢。
3.不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。
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