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TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑/红四氮唑) JNC91531

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TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑/红四氮唑)

中文名:TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑/红四氮唑)

英文名:TTC

CAS:298-96-4级别:Reagent Grade

分子量:334.8分子式:C19H15ClN4

纯度:>98%储存条件:-20℃

产品简介

2,3,5-氯化三苯基四氮唑,又称四唑红,简称TTC,TTZ,或TPTZ,一种脂溶性光敏感复合物,即可用来检测种子的生存能力,也可用来检测哺乳动物组织的缺血梗塞。检测机制在于TTC本身可作为一种氧化还原指示剂,活细胞内的脱氢酶(尤其是线粒体内的琥珀酸脱氢酶)可以将TTC还原为红色甲臢化合物TPF(1,3,5-triphenylformazan)。对于种子或者植物组织来说,染色结果为活组织被染成不同程度的红色,死组织或者无生命力的组织不着色。对于缺血梗塞组织,因组织坏死脱氢酶活力丧失呈现苍白色,而正常组织呈深红色。TTC常用的染色浓度为2%(w/v)(货号:SL7140),也可根据组织类型做浓度的适当调整。
染色方法
染色工作液的配制

TTC通常用磷酸缓冲盐溶液来配制,pH范围为6.5-7.5之间,常用的工作浓度为2%,也可用1%或者更低的浓度,根据自身实验体系调整。

可使用以下的缓冲盐体系配制:

1、取9.078g KH2PO4(Mw:136.09)溶于1L去离子水内,制备成66.7mM KH2PO4储存液;取9.472g Na2HPO4·H2O(Mw:137.99)溶于1L去离子水内,制备成68.6mM Na2HPO4储存液;将两份KH2PO4储存液与1份Na2HPO4储存液充分混合,即得到需要的磷酸缓冲液溶液。

2、根据需要的TTC工作液浓度来制备,如加入2g TTC粉末到100ml混合的磷酸盐缓冲液中,即得到2%的染色工作液。此时的溶液pH值在6.5-7.5之间。此工作液可装到不透明的白色瓶或者棕色瓶子内,4℃保存几个月稳定。

注意:TTC染色液的缓冲体系可根据自己的实验习惯来调整;也可用去离子水来溶解配置成10mg/ml的储存液,过滤除菌,建议此法染色液当天使用。

使用方法:

1、取材:动物麻醉后立即取新鲜组织(如脑、心脏),不经固定液固定,将组织直接放入-20℃速冻20-30min,如果不急用,可以暂时放置-80℃冻存。

2、组织块切片:将冻好的组织稍解冻,用莱卡刀片手动切片,厚度2-3mm为宜,切面整齐。

3、TTC染色:将切片放入提前预热好的的TTC染色液中,放入37℃水浴锅中避光孵育 15-30min,间隔5-8min轻轻摇动组织,使其均匀接触到染色液,并观察染色结果。

4、拍照:组织成色后,加入固定液终止反应,并避光保存组织,照相机拍照。

染色判读:

组织正常区呈红色,梗死区呈苍白色。

注意事项:

1、标本越新鲜越好,勿固定,刀片宜薄而锋利,在冰箱中速冻的时间以能顺利切片为宜,保持切片平整。

2、染色后的标本浸存于固定液中避光保存,染色结果能保存数月,在阳光下易褪色;

3、TTC染色液避光4℃可保存一个月,使用前先复常温。

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