DNA去磷酸化试剂盒
产品及特点 分子克隆时，载体的自连极大降低了连接效率，如果对载体 DNA 两个 5′端的 -PO4 基团进行去磷酸化处理，则可以抑制自连反应。此外在进行 DNA 5′端标记 前，也需要将其本来的-PO4 基团去除以便加上标记基团。本公司开发的 DNA 去磷 酸化产品就是针对这一目的而开发。它具有下列特点：
1. 把 DNA 5′端的-PO4 基团变成-OH 基团，使其丧失连接能力。
2. 模板可以是单链 DNA，也可以是双链 DNA，既可以是平末端，也可以是 5′端 突出或 3′端突出的粘性末端。
3. 处理后的核酸纯化后可以直接用于连接反应和标记反应。
4. 本产品足够 20 次 20μL 体系的去磷酸化实验
5. 本产品仅供科研使用。
规格及成分
运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期为 12 个月。
自备试剂 DNA 片段
使用方法 注意：dNTP 和 ATP 也是碱性磷酸酶的底物，所以如果 DNA 溶液中有 dNTP（比如 PCR 产物中）和 ATP，一定要先将其去除，否则它们会耗掉大量的碱性磷酸酶活性，降低 DNA 去磷酸化效率。
具体操作如下(本试剂盒不提供相关试剂，需要从本公司另购相关试剂，下列操作仅供参考)：
一、纯化 DNA 片段的去磷酸化
1、在微量离心管中配制下列反应液（20μL）：
2、建议在 37℃反应 30 分钟（对平末端、5′端突出或 3′端突出的 DNA 片段均采用此保温条件）。
3、65℃反应 5 分钟变性碱性磷酸酶。
4、DNA 片段可以直接用于连接。
二、限制性酶切反应的同步去磷酸化
5、本碱性磷酸酶在几乎所有限制性内切酶的缓冲液中都有活性，所以可以按 1ug3Kb DNA 加 1μL 碱性磷酸酶的比例直接加到限制性内切酶的反应液中（反应液中不能含 dNTP 和 ATP）。
6、加热灭活限制性内切酶和碱性磷酸酶（灭活条件根据限制性内切酶不同而不同，但不能低于 65℃，时间不能短于 5 分钟，否则不能灭活碱性磷酸酶）。灭活后的样品可以直接用于后续实验。
7、如果不能采取加热灭活限制性内切酶和碱性磷酸酶，则需酚/氯仿抽提去除酶。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
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