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FlaPure Plant Total RNA Extraction Kit 植物总RNA提取试剂盒(离心柱型)JNC9B1805

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FlaPure Plant Total RNA Extraction Kit 植物总RNA提取试剂盒(离心柱型)

产品组成

组分规格(50 次)
裂解液 PRL(Buffer PRL)40 mL
去蛋白液 PRW(Buffer PRW)60 mL
漂洗液 PRW1(Buffer PRW1)20 mL
无 RNA 酶双蒸水(RNase-Free ddH2O)10 mL
RNase-Free DNase I550 µL
DNase Buffer5 mL
RNase-Free FlaPure RNA Columns50 个
RNase-Free FlaPure gDNA Remove Columns50 个
收集管(Collection Tubes(2.0 mL))100 个

保存条件

本试剂盒中 RNase-Free DNase I 和 DNase Buffer 置于-20 ℃保存,其余组分常温(10~25℃)保存 18 个月。

产品简介

本产品适合于从 10~200 mg 普通植物中提取总 RNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术,提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提,整个提取过程只需 20~30 min。试剂盒采用 DNase I 膜上消化,可高效地去除 DNA,得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern Blot、Poly A 纯化,核酸保护和体外翻译等实验。

产品特点

操作简便:20~30 min 内完成数个样品的总 RNA 提取;

高效去除基因组 DNA:DNase I 膜上消化,高效去除 DNA;

安全低毒:无需酚、氯仿等有毒试剂;

RNA 纯度高:提取的 RNA 无杂质残留,适用于对纯度、完整性要求很高的下游实验。

本产品适用于普通植物样品的总 RNA 提取。

注意事项

1. 第一次使用前应在漂洗液 PRW1 中加入 4 倍体积的无水乙醇;

2. DNase I 工作液的配制:10 µL DNase I + 60 µL DNase Buffer,轻轻吹打混匀,现用现配;

3. 使用无 RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染,经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌、汗液及 RNase 等,可能导致 RNA 降解;

4. RNA 在裂解液 PRL 中时不会被 RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含 RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在 150℃烘烤 4 h,塑料器皿可在 0.5 M NaOH 中浸泡 10 min,然后用水彻底清洗、灭菌;

5. 配制溶液如 50%、70%乙醇应使用 RNase-Free ddH2O(将水加入干净的玻璃瓶中,加 DEPC至终浓度为 0.1%(V/V),混匀放置过夜后高压灭菌);

使用方法

1. 样品处理:用液氮将植物样品研磨成细小粉末。称取 10~200 mg 粉末至 1.5~2.0 mL 预冷的离心管中(加裂解液前样品不能解冻,初次使用推荐样品量为 30~50 mg,根据结果再调整用量);

2. 立即加入 600 µL Buffer PRL 及 20 µL β-巯基乙醇(自备)至样品中,高速涡旋 20~60 s 混匀样品,室温静置 5 min;

3. 室温下 14,000×g 离心 5 min;

4. 将 RNase-Free FlaPure gDNA Remove Column 装在 2 mL 收集管中,把上一步的上清液转移至柱子中。12,000×g 离心 1 min,弃去柱子,保留滤液;

5. 取 0.5 倍体积无水乙醇加入滤液中,用移液枪吸打 3~5 次;

6. 将 RNase-Free FlaPure RNA Column 装在 2 mL 收集管中。取上一步混合液(≤750 µL)至柱子中。12,000×g 离心 1 min;

7. 弃滤液,把柱子装回收集管中。取剩余混合液至柱子,12,000×g 离心 1 min;

8. 弃滤液,把柱子装回收集管中。加入 500 µL Buffer PRW,10,000×g 离心 10 s;

9. 弃滤液,把柱子装回收集管中,加入 70 µL 配置好的 DNase I 溶液至柱子膜中央(DNase I 溶液:10 µL DNase I+60 µL DNase Buffer,轻轻吹打混匀)。室温放置 15 min。

10. 加入 500 µL Buffer PRW,室温静置 1 min,13,000×g 离心 1 min;

11. 弃滤液,把柱子装回收集管。加入 500µL Buffer PRW1(已添加指定量无水乙醇)至柱子中,10,000×g 离心 10 s;

12. 重复步骤 11;

13. 弃滤液,把柱子装回收集管。13,000×g 离心 2 min,开盖置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残留的漂洗液;

注意:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液的残留,可能会影响后续的 RT 等实验。

14. 将柱子转移至 1.5 mL 离心管。加入 30~100 µL RNase Free ddH2O 至吸附膜中央。室温静置

3 min。12,000×g 离心 1 min(柱子最小的洗脱体积是 30 µL,若 RNA 产量超过 30 µg,推荐进行第二次洗脱)弃去柱子,将洗脱的 RNA 置于-80 ℃保存。

仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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