本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞并结合破壁酶特异消化酵母细胞壁,能在1 h内从酵母培养液中分离出高纯度质粒DNA。酵母收集后,加入破壁酶去除细胞壁后,然后碱裂法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低PH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高PH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
推荐使用量及产量:通常酵母质粒拷贝数都很低,高拷贝质粒最大得率一般为每5 mL培养物提取1 μg左右的质粒。用于下游试验时通常建议使用量为:1-5 μL用做PCR模板;5-10 μL用于转化大肠杆菌,选择高效率的感受态细胞。
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