粪便样品DNA保存液
中文名:粪便样品DNA保存液
英文名:Feces DNA preservation solution
CAS:N/A级别:N/A
分子量:N/A分子式:N/A
纯度:N/A储存条件:RT
产品简介
粪便样品DNA保存液可以在室温条件下保存DNA 样品。它能迅速渗入细胞内，通过抑制DNase的活性而达到保护DNA的完整性的目的。
适用于不能及时进行DNA提取的粪便样品的采集。
保存液使用方法：
一：批量自采：
1：采便管准备
1）患者采样盒中包括：采便管2管（每管装有7.5ml保护液以及6-8颗玻璃珠），冰袋3个。
2）患者回家后，需将冰袋放入冰箱冷冻层，并在送样当天进行采便。
2：采便方式：
1）准备一张纸在排便时将大便与便池水隔绝；
2）采便时取中部未沾染便池水和尿液的大便；
3）用采便管中的小勺挖取粪便，放入采便管中，盖紧管盖，放入采样盒中；
注意：2个采便管都需要挖取粪便，每管挖取3-4勺粪便；
4）从冰箱冷冻层中取出冻好的冰袋，放入蓝色采样盒中，以保持样品低温环境，并尽快送回医院。
二：少量自采
1：在粪便样品中加入3-5倍体积的粪便样品DNA保存液。
保存时间说明：
1:实测粪便样品DNA保存液，于4℃可稳定保存DNA 15-30天；于室温（≤30℃）可稳定保存DNA 7-15天。
2:如需长期保存，可在粪便DNA提取步骤3中弃上清后直接-20℃或-80℃长期冻存。
粪便DNA提取：
1：取200μL样品匀浆至拧盖的2mL 离心管。
样品匀浆制备： 1）将采便管用用漩涡震荡器，混匀至无块状；
2）用1mL注射器接1mL枪头搅拌；
3）枪头（1mL）减去1cm左右，吸之前摇匀，尽量吸取内容物，否则提取的DNA量过少；
2：加入1 mL PBS，用旋涡振荡器混合均匀，离心（15000rpm,5min,4℃） 。
3：弃1mL 上清，重复2一次。
4：弃950μL上清后，加入300μL Tris-SDS,500μL Tris-饱和酚，移入已加入0.33-0.35g玻璃珠（φ0.1mm）的2mL圆底离心管中。
5：震荡呈乳白色，在均质(Beat-Bitter)中均质45s，离心（15000rpm,5min,4℃）。
6：将上层悬浊液400μL（2×200）转移到一个新的离心管中（圆头），加入200μL Tris-酚，200μL 氯仿/异丙醇（24：1）注：中间白色为变性蛋白相不能碰。
7：手摇（10-20次）（上下颠倒即可，轻柔），混匀呈白色，离心（15000rpm,5min,4℃）。
8：将250μL（2×125）上层悬浊液转移到新的1.5mL离心管中，加入25μL 3M的乙酸钠（pH=5.2）,加入300μL 异丙醇，手摇混匀后离心（15000rpm,5min,4℃）。-20℃静置20min.
9： 弃上清 （直接倒掉即可），加入500μL 70% 乙醇，手摇混匀，离心（15000rpm,5min,4℃）。
10：弃上清（直接倒掉即可），离心（12000rpm,1min,常温），用枪头（斜）吸去多余液体，开盖，室温干燥15min。
11：加入100μL TE, 5μL RNA酶，轻弹混匀，小离心机轻微离心（到6000rpm立即停止），37℃恒温箱静置10min.
12：测定浓度及电泳。
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