DNase I，RNase-free（适用于RNA纯化）
中文名:DNase I，RNase-free（适用于RNA纯化）
英文名:Dnase I solution RNase-free
CAS:N/A级别:N/A
分子量:N/A分子式:N/A
纯度:N/A储存条件:-20℃
产品简介
规格：1mL（200U/1000U）
保存条件：-20度保存，有效期2年。
产品简介：
DNase I 是一种需二价阳离子的脱氧核糖核酸内切酶，可用于降解单链或双链 DNA。其原理为 DNaseⅠ水解磷酸二酯键产生带有 5'-磷酸基团和 3'-OH 的单核苷酸或寡核苷酸。Mg2+或 Mn2+都可以激活 DNase I 的活性，而 Ca2+浓度直接影响酶的活性。Mg2+存在时可在双链 DNA 的每条单链上随机地产生切口；而在 Mn2+存在下可使双链 DNA 断裂，使DNA 片段化。用于无 DNA 污染的 RNA 的制备，逆转录及体外转录等实验。
酶贮存液：50 mM Tris-HCl, pH7.5 (25 ℃)； 10 mM CaCl2； 50% Glycerol。
10×DNase I Buffer： 100 mM Tris-HCl, pH7.5 (25 ℃) ；25 mM MgCl2； 1mM CaCl2。
组分说明：
使用说明一：用于总RNA中基因组DNA的去除
1. 以制备用于RT-PCR的RNA样品为例，配制10µL反应体系为例，如下表：
2． 37℃孵育5-10分钟。
3． 加入1 µL 50 mM EDTA，65℃孵育10分钟，使DNaseⅠ失活，终止反应。
4． 经过纯化得到纯品RNA（纯化方法见附加资料）。
使用说明二：用于RNA试剂盒（吸附柱法）提取过程中的基因组DNA的去除
1. 准备DNase I工作液（每个吸附柱需要50μL的工作液）。
工作液配置方法：10μL 10×Reation Buffer（with MgCl2）+2μL DNaseⅠ（RNase Free）+88μL DEPC 水。
2. RNA试剂盒操作步骤选取。常规的RNA提取过程为裂解—纯化—上柱—洗涤—洗脱。请在洗涤的前一步插入DNA去除步骤。
3.在未经洗涤的含RNA和基因组DNA的吸附柱中，加入50 μL的DNase I工作液，37℃孵育5-10min。
4.12,000 rmp/min 离心1min。然后在穿透液中加入500-700 μL的去蛋白液或者是洗涤液，混匀后，重新加入此吸附柱中。静置2min。
5.接后续洗涤洗脱步骤。
附加资料：RNA纯化方法
方法一：酚氯仿纯化
1. 将需要纯化的RNA样品，DEPC水补足到100μL。
2．加入100μL的水饱和酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）混合液，震荡混匀。
3．12,000 rmp/min 离心1min。取上清加入50μL的氯仿-异戊醇混合液，震荡混匀。
4. 12,000 rmp/min 离心1min。取上清。
5. 加入10μL的3M 乙酸钠，250μL预冷乙醇，冰上放置10min。
6. 4℃，12,000 rmp/min 离心15min，弃上清。
7. 加入70%预冷乙醇洗涤管壁，4℃，12,000 rmp/min 离心15min，弃上清。
8. 沉淀干燥。
9. DEPC水溶解沉淀。
方法二：吸附柱纯化
1. 将需要纯化的RNA样品，加入等体积的异丙醇颠倒混匀。
2．将上述样品加入到吸附柱中间，室温静置2min。
3．12,000 rmp/min 离心1min。
4．在吸附柱中加入200μL的75%的乙醇，12,000 rmp/min 离心1min，弃穿透液。
5. 将吸附柱空甩30s。
6. 在吸附柱中间加入50μL的DEPC水，室温静置3min（需要将套管换成RNase-free的离心管）。
7. 12,000 rmp/min 离心1min，穿透液即为RNA。
注意事项
1. 因为 DNase I 经常用于需要保持 RNA 完整性的 DNA 消化实验，所以在酶制备过程中最大限度的避免了 RNase 污染，可以安全地用于 RNA 的提取，该酶中含RNase抑制剂，无需补加。
2. DNase I 受剪切力的影响比较大，使用前可以将离心管上下颠倒混匀，避免涡旋震荡。
3. 每处理 1μg RNA，DNase I 用量不要超过 1U。
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