沉淀法质粒大提试剂盒（Ecoli）JNC9031

沉淀法质粒大提试剂盒（Ecoli）

中文名:沉淀法质粒大提试剂盒（Ecoli）

英文名:Plasmid Maxiprep Kit

CAS:N/A级别:N/A

分子量:N/A分子式:N/A

纯度:N/A储存条件:RT

产品简介

  本试剂盒采用独特的缓冲系统，结合传统的异丙醇沉淀方法，可快速地获得大量高纯度的质粒DNA。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化和转染多种细胞等实验。

产品内容：

注：实验前请仔细阅读说明书。

注意事项：

a.裂解液II如有沉淀，37 ℃水浴溶解后使用。

b.裂解液II含NaOH，使用后请及时拧紧瓶盖，防止变质。

c.需自备70%乙醇和50 mL离心管。

细胞裂解：

1. 离心收集50-200 mL过夜培养的细菌，室温10,000 rmp离心5min（或5,000 rmp离心10min）。

2. 向菌体沉淀中加入10 mL悬浮液I，并加入100 µL的溶菌酶溶液，使用移液器吹打沉淀彻底混匀，静置2 min。

3. 向上述混合液中加入20 mL裂解液II，立即温和上下颠倒离心管6-8次，室温静置5-10 min左右至混合液变清亮，请勿静置过长时间。

注意：为避免基因组DNA污染和质粒断裂，请勿剧烈震荡离心管，请勿静置超过10 min。

4. 加入15 mL冰浴冷的纯化液III，立即温和上下颠倒离心管6-8次，冰上静置10 min。 4 ℃ 10,000 rpm离心15 min（或5,000 rmp离心20-30 min）。

质粒DNA纯化：

5. 将杂质过滤筛置于50 mL的离心管上，使上清液通过细胞筛流入离心管中。

6. 加入15 mL促沉液IV，上下颠倒充分混匀，室温放置10 min。

7. 4℃ 10,000 rpm离心20 min（或5,000 rmp离心20-30min）。轻轻倒掉上清液（请勿触及离心管壁白色沉淀）倒置在吸水纸上。

8. 在室温下用5 mL 70%乙醇涮洗管壁，倒掉乙醇（请勿触及离心管壁白色沉淀）。室温晾干，使乙醇充分挥发。

9. 用0.5-1.5 mL TE溶解DNA沉淀，琼脂糖凝胶电泳检测。长期保存请置于-20 ℃。

质粒DNA浓度及纯度检测：

得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。电泳可能为多条带，这些条带是质粒的多聚体造成的，不影响后续的酶切、转染等实验。OD260值为1相当于大约50 μg/mL双链DNA。

纯化的质粒DNA OD260/OD280通常在1.8-2.0左右，可直接应用于分子生物学等常规操作。如果溶解时不使用缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，但并不表示纯度低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值。