细菌RNA提取试剂盒
中文名:细菌RNA提取试剂盒
英文名:Bacterial RNA Extraction Kit
CAS:N/A级别:N/A
分子量:N/A分子式:N/A
纯度:N/A储存条件:2-8℃
产品简介
细菌RNA快速提取试剂盒适用于革兰氏阴性菌RNA提取，可以简单快速地纯化高质量的总RNA。纯化好的总RNA可用于mRNA分离，RT-PCR，Northern杂交等下游分子实验。如提取革兰氏阳性菌RNA建议用真菌RNA快速提取试剂盒提取。
操作步骤：（样品裂解，样品纯化，RNA收集）
离心条件均优先选择4℃，室温离心也可以。
下面的操作步骤是针对在 1.5 mL 塑料离心管中进行的微量提取的。
一：样品裂解
1. 在 1.5 mL 塑料离心管中离心收集 1-3 mL 新鲜细菌。注意:由于细菌 RNA 半衰期十分短，所以必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌。
2. 吸尽液体培养基，加入 0.5mL 裂解液，用枪充分吹打细菌沉淀后室温放置3 min，确保细菌全部裂解，没有块状物。
二：样品纯化
1. 将裂解物转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中，然后加入 0.2 倍体积的自备氯仿(0.5mL裂解液需 0.1mL 氯仿)，振荡器上充分振荡混匀 30 s。
2. 12,000rpm 室温离心 3 min，吸取上清到新的离心管中，建议取400-450uL上清。
3. 在上清中加入200-225uL的无水乙醇，颠倒混匀，加入RNA纯化柱中（如有絮状物或沉淀产生，一并加入纯化柱中）。12,000rpm离心1min，弃穿透液。
4.在纯化柱中加入0.5mL RNA洗涤液，室温12,000rpm离心30 s，弃穿透液。
三：RNA收集
1.将结合有RNA的纯化柱12,000rpm 离心 1min，甩干乙醇。
2. 弃收集管，将柱芯转移到1.5mL的RNase-free离心管中，加入30-50uL RNA溶解液，室温放置 1 min，12,000 rpm离心1 min 洗脱RNA。得到的RNA可直接用于后续实验或者 -80℃ 存放。
3. 如果要提高 RNA 产量，加入30-50uLRNA溶解液重复洗脱一次，合并两次穿透液；如果要提高 RNA 浓度，使用第一次的洗脱液加回到纯化柱中重复洗脱。
注意：建议RNA用于下游实验之前，先进行质量检测。经变性琼脂糖凝胶电泳后，会有清晰的28S和18S条带，以及中间弥散的mRNA条带，其中28S条带是18S条带亮度的1.5-2倍。有时还包括跑在最前面的较暗的5S条带。A260/A280 比值1.8~2.0对应RNA纯度90-100%之间。
好评度