细菌基因组DNA快速提取试剂盒 JNC9231

细菌基因组DNA快速提取试剂盒

中文名:细菌基因组DNA快速提取试剂盒

英文名:Bacteria gDNA Extract Kit

CAS:N/A级别:N/A

分子量:N/A分子式:N/A

纯度:N/A储存条件:RT

产品简介

产品内容：

产品介绍：

  细菌基因组DNA快速提取试剂盒不含巯基乙醇等刺激性试剂，对人体无害。

  对于革兰氏阴性菌可以在30min内完成实验，对于阳性菌可以在1h之内完成实验。

  提取的DNA OD260/280 一般在 1.8 以上，可直接用于 PCR、酶切、杂交等实验。

注意事项：

1. 裂解液I 和纯化液II 容易产生沉淀，纯化液II 比较粘稠，用前均需要放置在 65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。

2. 自备试剂：氯仿。

操作步骤：

一. 对革氏阴性细菌样品（无需溶菌酶）。

1. 将 0.1-1.5 mL 过夜培养的菌液转移到 1.5 mL 塑料离心管中，12,000 rpm室温离心 1 min沉淀细菌，弃上清。

2. 加入 300 μL 预热的裂解液I 到细菌沉淀中，充分吹打均匀。

3. 再加入 150 μL 预热的纯化液II 到离心管中，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。

由于纯化液II比较粘稠，可以采取称量方法取用，150 μL 约等于 150-160 mg。也可以将 1 mL 枪头剪去一截再吸取。

4. 65℃放置 3-5 min。如果室温放置，DNA 产量会降低 10-20%。

5. 加入 200 μL自备氯仿，震荡混匀 10-30 秒，此时溶液将呈乳白色。

6. 12,000 rpm 室温离心 2 min。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的 1.5 mL 塑料离心管中，避免触及中间层的白膜。

7. 加入 1.5 倍体积(约 0. 7 mL)的结合液III，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少 2 min。

8. 12,000 rpm 室温离心 1 min，DNA 将吸附在离心吸附柱的膜上，弃掉收集管中的穿透液。

9. 在吸附柱中加入500 μL洗涤液，12,000 rpm离心1 min，弃穿透液。

10. 再将吸附柱12,000 rpm离心30 s以甩干乙醇。

11. 将吸附柱放入一个干净的1.5 mL离心管中。在吸附柱中央加入50 μL洗脱液（65-70℃预热），室温静置5 min。12,000 rpm离心2 min。将穿透液重新加入吸附柱中央，12,000 rpm离心1 min以洗脱更多基因组DNA。

12. 检测DNA质量。将所得的基因组DNA保存于-20ºC冰箱。

二. 对革氏阳性细菌样品（需用溶菌酶处理）。

1. 将 0.1-1.5 mL 过夜培养的革氏阳性细菌 12,000 rpm 室温离心 1 min后, 重悬于 0.6 mL 溶菌液中（溶菌液配制:30 mL 无菌水+600 mg 溶菌酶，配制后最好分装成小管并放-20℃长期保存，每次只用一小管)，颠倒混匀 5-10 次后放 37℃保温至少 30 min。(有的革氏阳性菌种可能需更长时间，需要自己根据不同的细菌摸索)。

2. 12,000 rpm 室温离心 10 min，小心弃上清。

3. 后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第 2 步。