真菌基因组DNA快速提取试剂盒
中文名:真菌基因组DNA快速提取试剂盒
英文名:Fungal gDNA Extract Kit
CAS:N/A级别:N/A
分子量:N/A分子式:N/A
纯度:N/A储存条件:RT
产品简介
储存条件：RT储存，未开封保质期24个月。
产品说明：
本产品通过玻璃珠破碎或者液氮研磨菌体等物理方法，辅以强效的化学裂解液高效裂解真菌细胞壁，无需蜗牛酶等破壁酶长时间酶解细胞壁过程。单组样品提取可在30 min内完成。提取的DNA没有蛋白质以及盐离子污染，可直接用于酶切，PCR等后续实验。
操作步骤：
（一）菌体收集
1. 菌液集菌：取3-5 mL过夜培养的菌液（OD600一般在1以上）到离心管中，12,000 rpm离心2 min弃上清留菌体沉淀（1.5 mL离心管需离心3-4次收集菌体）。
2. 菌落集菌：用接种针或枪头在培养基上刮取尽可能多的菌落，转移到装有1 mL无菌水的离心管中，洗下接种针或枪头上的菌体。12,000 rpm离心2 min弃上清留菌体沉淀。
3. 洗涤菌体：在菌体沉淀中加入无菌水1 mL重悬菌体， 12,000rpm离心2 min弃上清留菌体沉淀。
（二）菌体裂解：
1. 玻璃珠破碎：在菌体沉淀中加入500 μL裂解液I和0.5 g的玻璃珠，常温涡旋震荡10 min。
注：此步也可液氮研磨：将菌体沉淀放入研钵中，加入液氮研磨成粉后转移到新的离心管中，再加入
500 μL裂解液I，常温涡旋震荡3分钟。
2.在含裂解产物的离心管中加入500 μL裂解液II，涡旋震荡3 min，12,000 rpm离心2 min，将分层后的上清液全部转移到一个5 mL的离心管中。
注意：下层为浅黄色有机蛋白相（玻璃珠在管底），上层为澄清或者乳白色水相，水相含基因组DNA，小心吸取，避免触及有机相。
（三）基因组DNA收集：
1. 在步骤（二）所得的上清中加入3倍体积的结合液III，颠倒数次混匀后，分三次上DNA吸附柱，每次上柱后均先室温放置2 min，然后12,000 rpm离心1 min，倒掉穿透液。
2. 在吸附柱中央加入500 μL洗涤液，12,000 rpm离心1 min，弃穿透液。
3. 再将吸附柱12,000 rpm离心30 s以甩干乙醇。
4. 将吸附柱放入一个1.5 mL离心管中。在吸附柱中央加入50 μL洗脱液（65-70 ℃预热），室温静置2 min。12,000 rpm离心2 min。将穿透液重新加入吸附柱中央，12,000 rpm离心1 min以洗脱更多基因组DNA。
5. 检测DNA质量。将所得的基因组DNA保存于-20 ℃冰箱。
注意事项：
1.如需大量提取，可以增加样品处理量，具体操作可咨询本公司。
2.为了您的个人健康，请戴手套操作。
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