DNA非变性PAGE制胶及电泳试剂盒（8%可制胶1L）
中文名:DNA非变性PAGE制胶及电泳试剂盒（8%可制胶1L）
英文名:DNA非变性PAGE制胶及电泳试剂盒（8%可制胶1L）
CAS:N/A级别:N/A
分子量:N/A分子式:N/A
纯度:N/A储存条件:见说明
产品简介
储存条件：Acr-Bis溶液4℃保存，有效期2年。
规格说明：配置终浓度8%的胶可以配置1L，终浓度20%的胶可以配置400mL。
产品组成：
注意：过硫酸铵（APS）为固体粉末，使用前配制成10% APS溶液（0.1 g APS加1mL双蒸水）。APS溶液最好现配现用，通常4℃可保存一周，-20℃能保存半年。
操作步骤：
用于 SSCP-PCR 分析的非变性 PAGE 电泳（其他应用请相应修改参数）
一、PAGE 浓度和交联度的选择指南
1.DNA-PAGE 一般推荐用 29：1（丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺）的交联度，在此条件下，DNA 片段和最适 PAGE 浓度对应关系如下：
二、胶制备DNA-PAGE 胶（参照附表）
1．参照附表的配置合适浓度的PAGE胶，摇晃混匀。
2．将配置好的胶倒入胶板，在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
3. 室温聚合 30-60 分钟（低温抑制聚合反应，故最好室温）。
4. 待胶凝固后拔出梳子，用 0.5×TBE 液冲洗加样孔。
三、样品处理
对一般样品、测序样品、微卫星 DNA、AFLP 样品、DDRT 样品、RPA 样品：将样品跟上样液 1:1 混合，95℃ 3 分钟变性，然后放冰上待用；对 TGGE 样品：可以直接上样。
四、电泳
1．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够 0.5×TEB 电泳液。
2．预电泳 5-30 分钟后，将冰上放置的样品上样。
3. 连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择功率（固定功率可以固定产热，这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压，产热都将随电泳时间而变化，不好控制）。对小胶一般用 5-6W 固定功率，大胶用 15-25W 固定功率。
4. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理（如银染）。注意：如果银染，必须延长固定时间以便洗出尿素，否则残留尿素会干扰后面的银染。
注意事项：
1. APS溶液不稳定，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换10% APS。
2. PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关；可通过改变APS及TEMED的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作。
3. 在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
4. 丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿戴实验服和一次性手套。
附表：（单位mL,TBE可选终浓度0.5×或者1×）
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