EB缓冲液(无菌，猪链球菌感受态制备试剂）JNC9201

EB缓冲液(无菌，猪链球菌感受态制备试剂）

中文名:EB缓冲液(无菌，猪链球菌感受态制备试剂）

英文名:EB buffer

CAS:N/A级别:N/A

分子量:N/A分子式:N/A

纯度:N/A储存条件:2-8℃

产品简介

操作步骤（以SC-19为例，仅供参考）：

（一）感受态细胞的制备：

1.挑猪链球菌2型菌SC-19单菌落于 10mL 加5%牛血清的TSB 中，37℃ 摇床培养过夜。

2.以1:100的比例转接于TSB培养基中，37℃ 摇菌2-3h，使菌液处于对数生长期（OD600约为0.3-0.5）。

3.6000 rmp/min 离心 1min。弃上清。以100mL 菌液为例。

4.用10mL 的CTB 重悬菌液，轻柔混匀，4℃ 6000rmp/min 离心 1min ，弃上清，用10mL的CTB重悬，冰浴 30 min。

5.4℃ 6000rmp/min 离心 1min ，弃上清，用10mL 的EB(EBS) buffer 洗两次。

6.离心弃上清，用500 uL 的EB 甘油缓冲液(EB 缓冲液加15%的甘油)重悬菌体沉淀，按100uL分装。

（二）转化：

1.在100uL感受态细胞中，加入质粒混匀，加入电转杯中，电击。

2.电击后，加入500uL的 在37℃ 预热的含胎牛血清的TSB中，37℃摇床孵育 2h 。

3.将菌液涂布于相应的抗性筛选的TSA平板，28℃培养 24-32h，得到含有穿梭质粒的链球菌单菌落。