5×蛋白上样缓冲液(含DTT)
中文名:5×蛋白上样缓冲液(含DTT)
英文名:5×Protein Loading Buffer(With DTT)
CAS:N/A级别:N/A
分子量:N/A分子式:N/A
纯度:N/A储存条件:-20°C
产品简介
产品说明：
5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (还原)是以溴酚蓝为染料，5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液，应用于还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。
5×蛋白上样缓冲液分别含有DTT和β-ME，可使蛋白质分子的链内二硫键和链间二硫键断裂，通过二硫键连接的各蛋白亚单位彼此分离，经考马斯亮蓝染色以后在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。
β-巯基乙醇和DTT都是还原剂，防止蛋白质被氧化，β-巯基乙醇常用浓度为5-20MMOL/L，DTT为0.5-1MMOL/L。因为β-巯基乙醇加入缓冲液后24小时易被氧化，其后加速蛋白质的失活，而DTT氧化后形成稳定的分子内二硫健，并不危及蛋白的巯基，所以在蛋白制备中常用β-巯基乙醇，而长期储存用DTT。
含DTT和β-ME冻存的上样液电泳使用区别不明显，除了β-ME气味较大之外。
使用方法：
1．将5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (还原)与蛋白样品按照1：4的比例混匀。
(加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。)
2．将蛋白样品置于95℃中加热3-5分钟。
3．待蛋白样品充分变性后冷却至室温，以小于3000 rpm的条件离心30秒。
4．离心后，以微量进样器取适量上清，直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内。
5．进行常规电泳，通常染料到达距离凝胶底端0.5-1 cm处即可停止电泳。
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