超低分子量蛋白Marker I（3.3-22kD）
中文名:超低分子量蛋白Marker I（3.3-22kD）
英文名:Ultra low MW protein Marker I
CAS:N/A级别:N/A
分子量:N/A分子式:N/A
纯度:N/A储存条件:-20°C
产品简介
超低分子量蛋白Marker I用来测定SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量，由3种多肽和2种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.3kD-22kD.5条带的大小分别为 3.3,5.8,7.8,14.8,22KD。
使用方法：
第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用。
一、制胶
（一）配置分离胶
1、按照表一将不同体积的双蒸水，40%PAA(19：1),4×凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
2、加入10%APS和TEMED,立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层，使凝胶表明保持平整。
4、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
（二）配置浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去
1、按照表一将不同体积的双蒸水，40%PAA(19：1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
2、加入10%APS和TEMED,立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀
3、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
4、静置30-60分钟待凝胶聚合。
表一（一块厚度0.75mm凝胶用量）
分离胶 | 浓缩胶 | |
18%T,5%C/6.0ml | 5%T,3.3%C/4.0ml | |
40%PAA(19:1) | 2.7ml | / |
40%PAA(29:1) | / | 0.5ml |
4×凝胶缓冲液 | 1.5ml | 1ml |
乙二醇（电泳级） | 1.8ml | / |
ddH2O | / | 2.5ml |
10%APS | 45ul | 30ul |
TEMED | 9ul | 6ul |
注：如非必须，不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间
二、电泳
1、取一管分好的Marker样品，95℃处理5分钟，充分混匀后备用
2、将电泳槽的外槽加入1×阳极缓冲液，内槽加入1×阴极缓冲液，轻柔拨出梳子，将Marker或蛋白样品加入点样孔，80-120V电泳30-60分钟左右，待指示前沿到达离胶上沿时，把电压调至150-200V，至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳，整个电泳过程大约需要2-3小时。（注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽）
表二 小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配置
一、1/40%PAA(29：1)(配制浓缩胶) 丙烯酰胺 38.67g 甲叉双丙烯酰胺 1.33g 用ddH2O溶解后定容至100ml，过滤后使用，贮存：4℃ | 二、40%PAA(19：1)(配制分离胶) 丙烯酰胺 38g 甲叉双丙烯酰胺 2g 用ddH2O溶解后定容至100ml，过滤后使用，贮存：4℃ |
三、4×凝胶缓冲液（配制凝胶用）[3M Tris 0.3%SDS pH8.45] Tris 182g ddH2O 300ml 1.5gSDS或15ml 10%SDS 用HCl调pH至8.45 用ddH2O定容至500ml 贮存：4℃ | 四、10×阳极缓冲液[2M Tris pH 8.9] 贮存：4℃ Tris 121.1g ddH2O 400ml 用HCl调pH值到8.9 用ddH2O定容至500ml 注：使用前稀释1×阳极缓冲液使用 |
五、10×阴极缓冲液（上槽缓冲液）[1M tris 1M Tricine 1%SDS pH8.3] TRIS 60.6g Tricine 89.6g SDS 5g 用ddH2O定容至500ml 贮存：4℃ | 六、2×Tricine蛋白样品上样缓冲液（10ml）1ml 1M Tris-HCl pH6.8 2.4ml 甘油 0.8g SDS 0.31g DTT 2mg 考马斯亮蓝G-250 用灭菌ddH2O定容至10ml 混匀分装-20℃贮存备用 |
七、染色液 冰醋酸 100ml 考马斯亮蓝G-250 0.25g 水 900ml | 八、脱色液 冰醋酸 100ml 水 900ml |
三、染色，根据常规染色
好评度