1×AP 缓冲液
中文名:1×AP 缓冲液
英文名:1×AP Buffer
CAS:N/A级别:N/A
分子量:N/A分子式:N/A
纯度:N/A储存条件:RT
产品简介
BCIP/NBT显色试剂盒(BCIP/NBT Color Development Kit)是一种用于免疫组化显色、Western等膜显色和诱导多功能干细胞iPS鉴定等的试剂盒。
BCIP即5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐（5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate），在碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,AP）的催化作用下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT氯化硝基四氮唑兰（Nitroblue tetrazolium chloride）发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的沉淀NBT-formazan。
试剂盒可以用于细胞或组织的碱性磷酸酯酶显色包括诱导多功能干细胞iPS的鉴定， Western等结合有碱性磷酸酯酶的膜的显色检测，细胞或组织内源性的碱性磷酸酯酶显色。
操作说明：
1. 对于组织切片或细胞样品或膜，在与碱性磷酸酯酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。对于检测内源性碱性磷酸酯酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。
2. 取40ul 25×NBT 加入到1ml 1×反应缓冲液中，混匀后，再加入40ul 25×BCIP混匀，即配成反应工作液，此反应液最好现配现用。（根据用量，三者可以等比例扩大配置量）
3. 把经洗涤的PVDF/NC膜浸入反应工作液中，室温避光孵育5-30分钟或更长时间（可长达24小时）。
4. 当蛋白带的颜色深度达到要求时，用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应。
5 对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining solution)染色，以便于观察。对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。
注意事项：
BCIP、NBT对人体有害，操作时应戴手套，避免与皮肤接触，用后及时彻底冲洗。
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