YPD Plus Liquid Medium JNC9004

YPD Plus Liquid Medium

中文名:YPD Plus Liquid Medium

英文名:YPD Plus Liquid Medium

CAS:N/A级别:N/A

分子量:N/A分子式:N/A

纯度:N/A储存条件:-20°C

产品简介

保存条件：-20 ℃，未开封有效期24个月。

包装内容：

说明：本产品经高压灭菌处理，为方便使用，短期可密封置于超净台常温保存。为了避免污染，长时间放置请于低温冰箱保存。

产品说明：

  用LiAc转化法进行酵母转化时，通常会通过加入Carrier DNA，选用对数期的酵母菌，以及优化质粒DNA的质量和浓度等方法来提高转化效率。在完成转化操作后，将转化产物用YPD Plus Liquid Medium重悬培养30-60分钟，有助于酵母细胞复苏，可以有效提高转化效率50-100%。适用于转化酵母菌株Y2HGold、AH109或Y187等，尤其适合对转化效率要求更高的文库转化。

  推出的三款转化试剂盒，转化效率为：经典转化Kit（SK2400）≈Super转化Kit（SK2401）＞快速转化Kit（SK2390），其中经典转化Kit转化效率可达103-105 cfu/μg，快速转化Kit转化效率可达经典转化效率的50-80%，转化产物增加YPD Plus复苏培养步骤，会在此基础上显著增加转化效率。

使用方法：（以经典转化方法为例，参考SK2400）

质粒转化：

1. 在含有约1 μg质粒的1.5 mL无菌离心管中，加入5 μL预变性的Carrier DNA（YT0003），50 μL酵母感受态细胞，350 μL LiAc / PEG3350混合液（YT0006）轻柔混匀。

2. 30 ℃水浴或者金属浴30 min，每10 min轻柔上下颠倒混匀一次。

3. 每管加入20 μL DMSO，轻柔上下颠倒混匀。

4. 42 ℃水浴热激15 min，每5 min轻柔上下颠倒混匀一次。

5. 3,000 rmp离心5 min，弃掉上清。

6. 菌体沉淀用1 mL YPD Plus Liquid Medium重新悬浮，30 ℃摇床震荡培养30-60 min。

7. 3,000 rmp离心5 min，弃掉上清，加入1 mL无菌0.9% NaCl重悬菌体。

8. 分别稀释10倍，100倍后涂布于相应的缺陷型培养基平板上。

9. 平板倒置30 ℃恒温培养3-5天。

文库转化：

1.在含有约5-15 μg文库质粒的15 mL无菌离心管中，加入20 μL预变性的Carrier DNA，600 μL酵母感受态细胞，2.5 mL LiAc / PEG3350混合液轻柔混匀。

2.30℃水浴45 min，每10 min轻柔上下颠倒混匀一次。

3.每管加入160 μL DMSO，轻柔上下颠倒混匀。

4.42 ℃水浴热激20 min，每5 min轻柔上下颠倒混匀一次。

5.3,000 rmp离心5 min，弃掉上清。

6.菌体沉淀用3 mL YPD Plus Liquid Medium重新悬浮，30 ℃摇床震荡培养90 min。

7.3,000 rmp离心5 min，弃掉上清，根据实验需求加入相应体积的无菌0.9% NaCl重悬菌体。

8.涂布于相应的缺陷型培养基平板上。

9.平板倒置30 ℃恒温培养3-5天。